Cas9基因敲除质粒构建服务

★ 服务简介

Cas9蛋白的CDS长达4kb,克隆难度和包毒难度都相对大,将Cas9基因高效导入细胞是应用Cas9/CRISPR系统进行基因敲除的难点之一,极大地限制可供选择的将基因导入细胞的方法。并且在用CRISPR/Cas9系统进行基因敲除时,还需要同时转入识别靶点的gRNA,筛选阳性细胞的抗性基因或荧光基因,用同源重组法进行基因敲除,还需要导入同源重组模板。如此多的基因共同表达,很难得到较高的基因编辑效率,造成后续的阳性克隆筛选和检测工作难度大。

汉尹生物独创性研发出慢病毒Cas9表达体系。该体系采用慢病毒体系先在细胞中稳定表达Cas9蛋白,构建稳定表达Cas9蛋白的细胞系,再在该细胞系的基础上导入gRNA和基因敲除实验中用到的其它原件。该体系采用慢病毒体系先在细胞中稳定表达Cas9蛋白,构建稳定表达Cas9蛋白的细胞系,再在该细胞系的基础上导入gRNA和基因敲除实验中用到的其它原件用于特异性基因敲除。

★ 服务描述

CRISPR/Cas9是一种最新的靶向基因敲除技术,能够强有力的作用于基因组的分子生物学工具。该技术现已证明能够在多种哺乳动物细胞,植物细胞,酵母中进行靶向基因敲除和定点编辑。传统的CRISPR/Cas9系统需要分别转录出tracrRNA(trans-activating RNA)和crRNA (CRISPR RNA),然后这两者通过碱基配对形成tracrRNA:crRNA二元复合体指导Cas9蛋白剪切特定位点的双链DNA(图1)。我公司采用新型的单链引导RNA(single guide RNA,sgRNA)可以模拟tracrRNA:crRNA二元复合体,能够直接与Cas9核酸酶构建在同一质粒上,表达后指导基因组DNA的切割(图2)。

图1:传统的CRISPR/Cas9系统 图2:单质粒CRISPR/Cas9系统


★ 服务特点

1.适用于在同一个细胞系中需要进行多个基因敲除的实验;

2.基因敲除效率比直接质粒转染更高;

3.提供多种不同荧光和抗性标记的慢病毒表达载体,更易筛选到基因敲除成功细胞;

4.接受cas9蛋白稳定表达不同细胞系定制。


★ 服务内容
提供哺乳动物的Cas9质粒构建服务;
★ 汉尹优势
1:1个质粒即可完成基因敲除实验;
2:只需两周即可完成质粒构建;
3:可以同时针对靶基因的多个位点进行剪切;
★ 客户所得
1:符合客户要求的重组质粒(约2ug)和甘油菌(约200ul);
2:完整的电子版实验报告(包括实验材料,步骤,载体图谱等);
3:完整的测序报告;


上一篇 : 定点突变
联系我们
021-64825535 13818044354
周一至周五 8:00-18:00
上海市闵行区虹梅南路2588号B205室
service@hanyinbt.com
邮箱:
"精益求精,诚信为本"
网站导航
周六周日:
13818044354(女士)15800793600(高经理)
免责声明:本站部分资讯来源于网络,如有侵权请及时联系客服,我们将尽快处理
Copyright©2019 汉尹生物科技(上海)有限公司
地址:
管理网站 举报反馈 网站统计