PCR法支原体快速检测试剂盒

发布日期:2022-05-06 09:46:37   浏览量 :280
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细胞培养是生命科学研究中常用的实验手段。细胞培养是一个动态的连续过程,细胞通常会对操作失误或污染物有所反应,这些反应往往表现出不正常的细胞状态或培养基外观。如果受到支原体污染时,细胞形态较之无明显变化,极易被忽视,往往直到污染非常严重时才能发现。受污染的细胞膜上可能有几百个支原体,这些支原体竞争营养并释放有毒的代谢产物,严重影响实验结果。

研究表明,至少二十多种支原体能污染细胞,其中最常见的有:口腔支原体(M.orale)、精氨酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)、发酵支原体(M. fermentans)人型支原体(M. hominis)、唾液支原体(M.salivarium)、肺支原体(M.pulmonis)和梨支原体(M.pirum)等。培养细胞的支原体污染率在4%-92%不等,其污染来源包括工作环境、操作者本身(一些支原体是人体的正常菌群)、培养基、血清、细胞交叉污染、实验器材和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。

确认细胞培养过程中出现问题的潜在原因是一项困难且耗时的任务,在细胞培养中,任何突然的变化都应该被怀疑,同时良好的试验规范和定期检测支原体污染也十分必要。支原体检测的方法有很多种,如直接培养、DNA荧光染色、ELISA和PCR法等。其中PCR法是较为理想的方法,它综合了几个优势:灵敏、特异、快速并且可以用直接用细胞培养上清液检测。本制品通过PCR方法检测培养细胞等生物材料中的支原体,所用引物为根据支原体16S-23S rRNA序列保守区域设计,只特异性扩增支原体DNA,检出灵敏度与特异性都很高。PCR扩增及电泳分析只需数个小时,操作方便简单。


本产品包含以下试剂:


注1:长期不用时,可-80℃冷冻保存。

注2:PCR反应极其灵敏,为防止假阳性,加样时,最后加阳性对照。


除本产品以外,还需准备以下试剂和仪器。


此PCR反应为巢式PCR,第一轮PCR结束后,取其反应产物为第二轮PCR模板。根据两轮PCR产物电泳条带之有无及片段大小来分析结果。贴壁细胞培养3-6天后,直接取其上清液进行PCR反应。

第一轮PCR

充分融化引物及Myco -1 PCR Mix,按下列表格配制反应液。

  1. 按下列条件进行PCR反应:

第二轮PCR

附录:各种支原体扩增片段大小


细胞
PCR
污染
支原体
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