shRNA稳转株构建服务

★ 服务描述
shRNA稳转株是指能持续稳定表达干扰特定基因shRNA的细胞。RNA干扰是基因功能研究中最常用的手段之一。我公司利用慢病毒将shRNA序列整合入细胞基因组,并通过慢病毒载体携带的抗性基因(通常为新霉素,嘌呤霉素,潮霉素)筛选出稳定转染shRNA的细胞,使其成为shRNA稳定转染细胞系。


★ 服务内容
1:shRNA干扰靶点序列的设计;
2:shRNA 慢病毒质粒的构建;
3:shRNA慢病毒包装与病毒滴度测定;
4::病毒感染靶细胞并从RNA水平(Real-time PCR)和/或蛋白水平(Western Blot)验证干扰效果;
5:选出干扰效果最好的细胞,利用慢病毒载体携带的抗性基因筛选建立稳定细胞系;
★ 服务说明
1:我们的RNA干扰服务针对所有的哺乳动物细胞,暂不提供植物和原核生物的RNA干扰服务;
2:RNA干扰的对象可以是编码蛋白的mRNA序列,也可以是长的非编码RNA(lncRNA)序列;
3:针对不同的靶基因,我们一般设计3-4条干扰序列,保证至少有一条序列干扰效果大于70%(RNA水平);
4:我们提供多个慢病毒干扰载体供客户选择(见下方载体信息);
5:对于干扰效果的验证,客户可以选择只从RNA水平(或蛋白水平)进行验证,也可选择两个水平都进行验证(lncRNA无法从蛋白水平验证);
6:靶细胞和Western Blot 实验需要的一抗由客户提供,也可委托我公司代购;
7:Real-time PCR采用Sybr green 法 三复孔进行干扰效果验证,确保实验结果真实可信;
★ 客户所得
1:构建好的慢病毒干扰质粒,剩余病毒及稳转株细胞;
2:完整的实验报告(包括实验材料,实验步骤,实验结果等)及慢病毒使用操作说明书一份;
★ 服务周期
从靶点设计到稳转株完成总共需要45个工作日;
★ 载体信息

载体编号

筛选标记

载体骨架主要元件

荧光

真核抗性

pHY-LV-KD1.1

GFP

U6-shRNA-CMV-GFP

pHY-LV-KD1.2

RFP

U6-shRNA-CMV-RFP

pHY-LV-KD1.4

puromycin

U6-shRNA-CMV-Puromycin

pHY-LV-KD2.1

GFP

U6-shRNA-EF1α-GFP

pHY-LV-KD3.1

GFP

U6-shRNA-UBC-GFP

pHY-LV-KD5.1

GFP

puromycin

U6-shRNA-CMV-GFP-PGK- Puromycin

pHY-LV-KD5.2

RFP

puromycin

U6-shRNA-CMV-RFP-PGK- Puromycin

pHY-LV-KD5.4

GFP

puromycin

U6-shRNA-UBC-GFP-PGK- Puromycin

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