microRNA 慢病毒包装服务


★ 服务描述
microRNA(miRNA)是一类小片段单链RNA , 最初是在核内由RNA聚合酶转录形成具有帽子结构(7MGpppG)和多聚腺苷酸尾巴(AAAA)的pri-miRNA,pri-miRNA在核酸酶Drosha及其辅助因子Pasha的作用下被处理成约70个核苷的pre-miRNA。pre-miRNA被运输出核后再由另外一个核酸酶Dicer将其剪切形成约22个核苷酸的成熟miRNA。成熟的miRNA 与RISC组装成RNA诱导的沉默复合体,通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA,并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。

图示:miRNA的成熟过程


★ 服务内容
1:miRNA 的过表达慢病毒包装
我公司采用扩增pri-miRNA及其两端的天然侧翼序列来构建miRNA的过表达质粒,并包装慢病毒。以实现miRNA在体外(内)的高表达。该方法相比化学合成的miRNA,具有可持续性表达,并且能用于难转染(例如干细胞,悬浮细胞等)细胞等优点。比pre-miRNA和mature miRNA 形式的过表达,具有表达效果更好,更能模拟体内天然的成熟过程。
2:miRNA的抑制
我公司采用TuD RNA(Tough Decoy RNA)的设计方法构建miRNA的抑制慢病毒载体。TuD RNA不同于以往的单链RNA,它是含有颈环结构的双链RNA , 能够抵抗胞内核酸酶的降解,让miRNA抑制可持续一个月以上。并且,TuD RNA的两条链都包含一个miRNA结合位点,能够更高效地隔离浓度较低的目标miRNA。因此,相比其它方法,TuD RNA能够更长效的抑制miRNA。

图示:TuD RNA的工作原理3:miRNA的靶基因验证
由于miRNA是通过其seed sequence(5’端2-8位核苷酸)与靶基因的3’UTR结合抑制靶基因的表达。因此,我们将待定目的基因的3’UTR区域构建至报告基因luciferase的后面,通过比较实验组和对照组报告基因表达的改变(监测荧光素酶的活性变化)来间接反映miRNA对目的基因的抑制作用。同时结合定点突变等方法进一步确认miRNA与靶基因3’UTR的作用位点。
★ 服务说明
1:客户只需提供miRBase数据库中的miRNA编号,我们就可以按照您的要求完成相关实验。
2:miRNA的过表达效果受诸多因素影响,与对照组相比,可以提高2—1000倍(如果本底表达水平较低,可以达到较好的过表达效果,如果本底表达水平较高,过表达效果会相对较低)。
3:我们提供多个microRNA慢病毒载体供客户选择(见下方载体信息);
★ 客户所得
1:符合客户要求的产品(质粒+甘油菌 或者 病毒+polybrene);
2:完整的电子版实验报告(包括实验材料,步骤,载体图谱等);
3:完整的测序报告;
★ 载体信息


载体编号

携带标记

载体骨架主要元件

荧光

真核抗性

MicroRNA过表达慢病毒载体

pHY-LV-miR1.1

CMV-GFP-MCS

pHY-LV-miR1.2

GFP

CMV-GFP-MCS-PGK- Puromycin

MicroRNA抑制慢病毒载体

pHY-LV-KD1.1

GFP

U6-TuD RNA-CMV-GFP

pHY-LV-KD1.2

RFP

U6- TuD RNA -CMV-RFP

pHY-LV-KD1.4

puromycin

U6- TuD RNA -CMV-Puromycin

pHY-LV-KD2.1

GFP

U6- TuD RNA -EF1α-GFP

pHY-LV-KD3.1

GFP

U6- TuD RNA -UBC-GFP

pHY-LV-KD5.1

GFP

puromycin

U6- TuD RNA -CMV-GFP-PGK- Puromycin

pHY-LV-KD5.2

RFP

puromycin

U6- TuD RNA -CMV-RFP-PGK- Puromycin

pHY-LV-KD5.4

GFP

puromycin

U6- TuD RNA -UBC-GFP-PGK- Puromycin

3’UTR报告基因慢病毒载体

pHY-LV-Report3.1

luciferase

CMV-luciferase-MCS

联系我们
021-64825535 13818044354
周一至周五 8:00-18:00
上海市闵行区虹梅南路2588号B205室
service@hanyinbt.com
邮箱:
"精益求精,诚信为本"
网站导航
周六周日:
13818044354(女士)15800793600(高经理)
免责声明:本站部分资讯来源于网络,如有侵权请及时联系客服,我们将尽快处理
Copyright©2019 汉尹生物科技(上海)有限公司
地址:
管理网站 举报反馈 网站统计